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蛋白质鉴定

货号:GA1046

品牌:Servicebio

价格:¥1000起

规格:

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  产品介绍:

  Nano LC-MS/MS技术是当前鉴定凝胶(包括二维凝胶)分离的蛋白胶带最灵敏、最可靠的方法。与MALDI-TOF的蛋白质鉴定方法相比,NanoLC-MC/MS具有更高的灵敏度和几乎100%的可靠性,而且具有MALDI-TOF不可比拟的从单一蛋白质胶带中准确鉴定出多个蛋白质组分的能力。可鉴定的样品包括:1D-SDS PAGE分离的蛋白胶条,2DE PAGE中的蛋白胶点,蛋白表达产物,免疫共沉淀(Co-IP)样品,组织全蛋白谱,蛋白溶液样本。质谱鉴定的原理则是基于鸟枪法(Shot-gun)?#33322;?#34507;白条带或者蛋白溶?#22909;?#20999;成肽?#20301;?#21512;物,经高效液相色谱分离得到若干较为简单的组分,再在线导入高分辨率质谱仪中进行分析。肽段在质谱仪中离子化后,会带上一定量的电荷,通过检测器分析,可得到各肽段的质荷比(m/z),从而得知各肽段的相对分子质量。为获得肽段的序列信息,质谱仪会选取某些肽段进行破碎,再次分析,获得二级质谱,检索软件根据二级质谱信息与相应的数据库比对,结合匹配度打分及错配过滤,可得到肽段的确切序列,进而拼接出各蛋白的完整序列,从而实现对蛋白的鉴定。

  实验流程:

 

  (1)采取适宜的方法提取样品中的蛋白;

  (2)提取的蛋白经过酶解成各个肽段;

  (3)样品在线引入Nano-LC-MS/MS 高分辨液质联用采集样品质谱图信息;

  (4)提交数据导入相应的蛋白质数据库进行肽段质量数匹配,检索蛋白信息。

  服务流程:

  注意事项:

  1 利用质谱进行蛋白样品的鉴定,在样品准备过程中需佩戴手套和头套,尽量避免自身角蛋白对样品的污染。;

  2 无法确保其中的所有的蛋白全部被鉴定到,但我们会尽可能多的输出样品中的蛋白信息;

  3 确认可用的蛋白质数据库。

  样品保存:

  胶条:蛋白量大于100ng(包含目标条带区域即可),4℃保存,冰袋运输,避免切胶包括过多非目的条带;注意:银染样本无法检测(考染不受影响)。

  溶液:蛋白大于10ug,-80℃冻存,纯干冰运输,避免反复冻融;注意:IP后磁珠-蛋白复合物样本中不要加入loading buffer,否则无法检测。

  细胞:1x106个,收集细胞沉淀,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

  血液:1mL,4℃保存,冰袋运输,避免剧烈振荡和冷冻结冰造成溶血。

  血清:500uL,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

  尿液:2mL,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

  动物组织:300mg,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融和固定?#33322;?#27873;。

  植物组织:500mg,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融和固定?#33322;?#27873;。

  微生物:干重200mg,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

  其他特殊样本另外咨询。

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